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cdna文庫名詞解釋(cdna文庫)
導讀 大家好,我是小夏,我來為大家解答以上問題。cdna文庫名詞解釋,cdna文庫很多人還不知道,現在讓我們一起來看看吧!1、(1)cDNA文庫是指細胞...
大家好,我是小夏,我來為大家解答以上問題。cdna文庫名詞解釋,cdna文庫很多人還不知道,現在讓我們一起來看看吧!
1、(1)cDNA文庫是指細胞全部mRNA通過逆轉錄得到cDNA后被克隆的總和。cDNA的組成特點是片段中不含基因的內含子和其他調控序列。
2、cDNA文庫構建基本步驟:①制備mRNA:全RNA提取與mRNA的分離提純;②合成cDNA:oligo dT與mRNA3’端poly(A)雜交作為引物合成第一鏈,第二鏈合成是以第一鏈為模板,DNA聚合酶催化。常用RNase H切割mRNA-cDNA雜合鏈中的mRNA序列產生的小片段為引物合成第二鏈的片段,再連接成完整鏈;③制備載體DNA:由于cDNA分子的長度在0. 5~8kb,常用的質粒載體和噬菌體載體都可以,載體選擇根據文庫用途確定,如噬菌粒載體具有噬菌體的高效性和質粒載體系統可以利用藍白斑篩選的便利;④cDNA的分子克隆:cDNA連入載體,轉化重組體,擴增;⑤對構建的cDNA文庫進行鑒定,測定文庫包含的克隆數,評價文庫質量。文庫是否有價值主要從文庫含量和插入片段的大小來評價,所構建文庫必須有足夠多的克隆數以確保基因組cDNA每一個序列至少有1個拷貝在文庫內。
3、(2)cDNA文庫同基因組文庫的差別主要在于基因組文庫(尤其是真核生物的基因組文庫)可能包含有非編碼序列,含有更豐富的遺傳信息。
本文到此講解完畢了,希望對大家有幫助。