凝膠電泳實驗步驟（凝膠電泳）

大家好，我是小夏，我來為大家解答以上問題。凝膠電泳實驗步驟，凝膠電泳很多人還不知道，現在讓我們一起來看看吧！

1、【分類】

2、（1）瓊脂糖 ( Agarose ) 是一種線性多糖聚合物 , 系從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介 質 , 其密 度是由 瓊脂 糖的濃 度決 定的。經過化學修飾的低熔點 (LMP) 的瓊脂糖 , 在結構上比較脆弱 , 因此在較低的溫度下便會熔化, 可用于DNA片段的制備電泳。

3、（2）聚丙烯酰胺凝膠主要有兩種方式 : 一是用于分離和純化雙鏈 D N A 片段的非變性聚丙烯酰胺凝膠。在未變凝膠中分離 D N A 的缺點是 D N A 的遷移 率受堿 基組 成和序 列的 影響。由于無法得知未知 D N A 的遷移是 否反 常 , 故不能用未變性的聚丙烯酰胺凝膠 電泳 確定雙鏈 D N A 的大小。二是用于分離及純化 單鏈 D N A 片 段的 變性聚 丙烯 酰胺凝 膠。這 類聚丙烯酰胺凝膠是在核苷酸堿基配對抑制劑( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 變性DNA的移動速度同其堿基組成及序列幾乎完全無關 , 故可用于分離及純化單鏈DNA片段和DNA測序等。

4、【基本原理】

5、凝膠電泳的原理比較簡單。當一種分子被放置在電 場當 中時 , 它們 就會 以一定 的速 度移向適當的電極 , 這種電泳分子在電場作用下的遷移速度 , 叫做電泳的遷移率。它同電場的強度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數成正比。也就是說 ,電場強度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數量越多 ,其遷移的速度也就越快 , 反之則較慢。由于在電泳中使用了一種無反應活性的穩定的支持介質 , 如瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺 膠等 , 從而降低了對流運動 , 故 電泳 的遷移率又是同分子的摩擦系數成反比的。已知摩 擦系數 是分 子的大 小、極性及介質 粘度 的函數 , 因此根據分子大小的不同、 構成或形狀的差異 , 以及所帶的凈電荷的多少 ,便可以通過電泳將蛋白質或核酸分子混合物中的各種成分彼此分離開來。在生理條件下 ,核酸分子的糖- 磷酸骨架中的磷酸基因 呈離子狀態 ,從這種意義上講 ,D NA 和 R N A 多核苷酸鏈可叫做多聚 陰離 子 ( P ol yani o n s )。因 此 , 當核 酸分 子 被放 置在 電場中時 , 它們就會向正電極的 方向遷 移。由 于糖- 磷酸 骨架 結構 上的重 復性 質 , 相同 數量 的雙鏈 D N A 幾乎具有等量的凈電荷 , 因而 它們 能以 同樣 的速 度向 正電 極 方向 遷移。 在一 定的電場強度下 , D N A 分子的這種遷移速度 , 亦即電泳的遷移率 , 取決于核酸分子本身的大 小和構型 , 分子量較小的 D N A 分子比分子量較大的 D NA 分子遷移要快些。這就是應用凝膠電泳技術分離 D N A 片段的基本原理。

本文到此講解完畢了，希望對大家有幫助。