昆蟲標本制作方法（標本制作方法）

大家好，我是小夏，我來為大家解答以上問題。昆蟲標本制作方法，標本制作方法很多人還不知道，現在讓我們一起來看看吧！

1、標本制作分很多種：血涂片、植物壓片、金相切片等

2、　　舉一個組織標本制作的方法

3、　　石蠟切片標本制作法：

4、　　這是最常用的組織學標本的制作方法。這種方法包括以下幾個步 驟：取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封固。

5、　　1．取材、固定：動物組織在死后及離體后會很快解體，這可能是由于細菌或是由于組織 本身所含酶的分解所致。所以，被檢動物在乙醚麻醉下或以不同方法處死后，應立即進行取 材和固定，以停止其分解作用，盡可能保存細胞、組織生前結構和成分，還能抵抗后繼各步 驟處理時所產生的影響。 1)取材：即從動物體內取下被檢的器官或組織。以肝為例，取材的步驟為：將動物麻醉 或處死后，腹部向上固著在蠟盤上，打開腹部，暴露肝，用鋒銳的小剪或手術刀細致而又迅 速地取下一塊厚度和大小適宜(0．5cm’)的肝，立即投入固定液內‘：。：

6、　　2)固定：固定是把組織用化學試劑浸泡，使其蛋白質等成分迅速凝固，盡量保持生前形 態結構而不發生死后的變化。固定時所使用的化學溶液，稱為固定液。

7、　　常用固定液的配方：

8、　　①Susa液(HeidenhainfsSusafluid) I液： 氯化汞(升汞)飽和水溶液 B液： 氯化鈉 三氯醋酸 冰醋酸 40％甲醛 蒸餾水 50．0ml o．58g 2．08g 4．oIml 20．0m1 80．0ml臨用時取等量的I液和2液混合后，將組織塊投入，固定12h。

9、　　Helly液（Helly`s fluid) 重鉻酸鉀 2．5g 氯化汞 5．0g 硫酸鈉 1．0g 蒸餾水 100．0m1 40％甲醛 5．0m1(臨用時加入) 。

10、　　⑧甲醛(10％nelltralformalin) 40％甲醒 10．0m1 蒸餾水 90．0m1。

11、　　④Bouin液(Bouinfsfluid) 苦味酸飽和水溶液 75．0m1 40％甲醛 25．0m1 冰醋5．0m1。

12、　　⑤Carnoy液(Carnoy`s fluid) 無水酒精 6ml 氯仿 3m1 冰醋酸 1m1 。

13、　　2．脫水、透明、浸蠟、包埋：這幾個步驟是為了將組織包埋在較硬的物質即石蠟中，以 便于制備薄的切片。

14、　　1)脫水：普通固定液多是水溶液，必須先脫去水分，為浸蠟創造條件。脫水劑通常用酒 精。脫水的步驟是逐步升高酒精溶液的濃度，以去凈組織塊內的水分，并完全由無水酒精取 代。Susa液固定的組織塊，須先入含碘的95％酒精，脫水并洗去組織內的汞沉淀，然后換 90％、95％酒精和無水酒精。10％甲醛液固定后的組織塊，脫水時應依次經70％、80％、 90％、95％酒精和無水酒精。

15、　　2)透明：因石蠟不溶于酒精而溶于二甲苯，因而組織塊經脫水后須再用二甲苯替代出酒 精。組織塊浸入二甲苯后逐漸變得透明，故此步驟稱為透明。透明時間依組織塊大小及性質 而定。

16、　　3)浸蠟：將透明好的組織塊置入已在溫箱(56—58℃)內熔化的石蠟內，放置適當時間， 使石蠟浸入組織并替換出二甲苯。

17、　　4)包埋：在包埋器的內壁涂一層甘油，傾入熔化的石蠟，將浸透蠟的組織塊放到里面， 擺好方位，挨蠟液表面凝固后，將包埋器投入冷水浴中，使石蠟冷卻凝固，即得堅硬的組織 蠟塊，經過修整即可用于切片。

18、　　3．切片：一般用輪轉式切片機制作組織學切片。切片機一般結構為：切片刀固定臺、載 物臺(機頭或標本固定臺)、切片厚度調節裝置、機輪等部件。切片時：①將組織蠟塊固著在 木托或金屬托上，再將蠟塊托固定于載物臺；⑧將磨好的切片刀固定于切片刀固定臺，調好 蠟塊與刀的距離；②調整切片厚度調節裝置，一般調至切6ym厚度的小格上；④轉動機輪，每 轉動一周，載物臺就向切片刀側移動6ym，同時還垂直下降上升往返一次，于是切得6ym厚 度的切片一張；如機輪連續轉動，就可得一條連續的切片蠟帶。

19、　　取下切片，置于涂布一層蛋白甘油的載玻片上，滴上適量水，于酒精燈上徐徐加溫，至 切片在水面展平，傾去水，擺好切片位置，放入烤片箱。待切片干燥并牢固地附著于載玻片 后，即可取出，進行染色。

20、　　4．染色、封固：染色的目的是使組織內的不同結構染上不同藏色以便于在顯微鏡下觀察。 染色的方法很多，可根據研究目的選用。組織學和病理學教學標本最常用的基本染色方法是 蘇木精·伊紅染色(H．E染色)。該方法可將細胞核染成藍紫色，細鮑質染成粉紅色，使細 胞結構對比分明。因此，現將該方法介紹如下。至于在實習過程中遇到的其它特殊染色法，將 分別介紹于首次出現之處。

21、　　蘇木精·伊紅染色(hematoxylin and eosinstain，簡稱H．E染色)：

22、　　1)染色的配方：

23、　　①Erich蘇木精染液(Ehrlich’shematoxylin) ； 蘇木精 2．98 95％酒精 100．0ml 蒸餾水 100．0m1 鉀礬 3．0g 冰醋酸 10．0m1 甘油 100．Oml ‘的染液在至氣中氧化2個月左右即可使用。

24、　　②1％伊紅染液(1％Eosin) 伊紅 1．08 蒸餾水 100．0

25、　　2)染色步驟：

26、　　①脫蠟：將裱好的干燥切片放入二甲苯浸2次，每次放置5。10min，以便將石蠟脫凈。．

27、　　②下行酒精到水：脫蠟后，切片入無水酒精浸2次，每次2min，以便洗去二甲苯；然后 經95％、90％、80％和70％酒精，每次2min；隨后入蒸餾水浸洗。若組織是用含汞的固定液 (如Susa液、Helly液)固定，還須經含碘的70％酒精脫汞后再入70％酒精及蒸餾水。

28、　　②蘇木精染色：將蒸餾水浸洗后的切片放入Ehrich蘇木精染液中，浸染5一10min。

29、　　④藍化和分色：切片由染液取出以后，用自來水沖洗，挨切片變成藍色后，再用稀鹽酸 70％酒精溶液進行分色，脫去多余的染料(因為蘇木精染色后，往往胞核著色較深，胞質及 結締組織纖維等亦稍著色，影響下步染色及觀察)。然后再用自來水沖洗，使之藍化，約需15 ~30min。

30、　　⑤伊紅染色：切片用蒸餾水浸洗后，放入1％伊紅染液，浸染5—10min。

31、　　⑧上行酒精脫水：將切片用蒸餾水洗去附在載玻片上的染液后，經70％、80％、90％95％ 酒精和2次無水酒精脫水，每次一般為2min。：

32、　　⑦透明：切片入二甲苯2次，每次2min。

33、　　⑦封固：從二甲苯中取出切片，在切片的組織上滴加適量樹膠(balsam)，上面再加一蓋 玻片，使樹膠布滿于蓋玻片與載玻片之間的間隙，封固即告完成。將封好的切片標本放入烤 箱．待蓋玻片粘著牢固后，即得可供長期觀察和保存的H．E染色標本。

本文到此講解完畢了，希望對大家有幫助。