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    增殖灶是什么意思(增殖)

    導讀 大家好,我是小夏,我來為大家解答以上問題。增殖灶是什么意思,增殖很多人還不知道,現在讓我們一起來看看吧!一、MTT比色:MTT比色是一種...

    大家好,我是小夏,我來為大家解答以上問題。增殖灶是什么意思,增殖很多人還不知道,現在讓我們一起來看看吧!

    一、MTT比色:

    MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測細胞生長和存活的方法,其原理是外源性MTT(四唑鹽)可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物并沉淀在細胞中,而死細胞無此功能,DMSO(二甲基亞砜)能溶解細胞中的紫色結晶物,用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值,可間接反映活細胞數量。在一定范圍內,MTT結晶物形成的量與細胞數成正比,此方法已廣泛用于檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面,具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點,與細胞計數有良好的相關性。

    二、rdU標記法

    1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處于G0期。

    2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。

    3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。

    4.甲醇/醋酸固定10min。

    5.經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

    6.5%正常兔血清封閉。

    7.甲酰胺100℃,5min變性核酸。

    8.冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。

    9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。

    三、結晶紫法

    1.體外細胞培養結束后,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置于振蕩器上搖20min。

    2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。

    3.置空氣或烘箱37℃徹底干燥。

    4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。

    5.用蒸餾水洗滌,至多余的結晶紫液沖洗干凈。

    6.置空氣或37℃烘箱中徹底干燥。

    7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。

    8.1h后在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。

    四、酸性磷酸酶法

    1.96孔細胞培養板中培養細胞,去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次(如為懸浮細胞則用離心洗滌)。

    2.去洗滌液后加入磷酸酶底物100μl/孔。

    3.37℃,孵育1~4h。

    4.加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。

    5.在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度,將細胞培養板其中不含細胞,同樣處理過的一孔作為空白對照,所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標準對照,以細胞數為X軸,光吸收度為Y軸,可作直線回歸,可推算出每孔中的細胞。

    本文到此講解完畢了,希望對大家有幫助。

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