rna提取步驟（rna提取）

大家好，我是小夏，我來為大家解答以上問題。rna提取步驟，rna提取很多人還不知道，現在讓我們一起來看看吧！

rna提取怎么室溫干燥

RNA提取步驟及注意事項（僅供參考）：

實驗步驟如下：

1.取50—100mg的組織,加入1ml Trizol試劑，用勻漿器打勻(Trizol先放于冰上)。

2.將勻漿室溫放置5min。

3.加入200μl氯仿,劇烈震蕩混勻30s，冰上靜置3min。

4.12000rpm，4℃離心15min。

5.將上清液小心轉移到新的1.5ml離心管中（取400μl），加入等量體積的異丙醇，上下顛倒幾次混勻，室溫下放置15min。（此步中注意：不要吸取任何中間層物質，寧缺勿爛。）

6.12000rpm，4℃離心15min。

7.小心移去上清液，防止RNA沉淀丟失。

8.用70%乙醇（DEPC處理的水配制）洗滌1次，加入700μl乙醇，將RNA沉淀彈起，漂洗。（此時RNA是不溶解的）

9.8000rpm，室溫離心10min。

10.盡可能徹底地吸走上清，防止RNA沉淀丟失。

11.真空離心干燥3—5分鐘，或放在室溫下使乙醇完全揮發掉。

12.沉淀用30μl DEPC-H2O溶解。如發現沉淀難溶，68℃處理10min。

13.RNA檢測

(1)測定樣品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA計算RNA的產量。

OD260/OD280在1.8-2.0。

(2)進行甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳,確定RNA的完整性和污染情況。

注意事項：

1.獲得RNA效率低有一下原因

a:樣品裂解或勻漿處理不徹底

b:最后得到地RNA沉淀未完全溶解

2.A260/A280＜1.65原因

a:檢測吸光度時，RNA樣品不是溶于TE，而是溶于水。低離子濃度和低PH條件下，A280值會較高

b:樣品勻漿時加地試劑量太少

c:勻漿后樣品未在室溫放置2分鐘

d:水相中混有有機相

e:最后得到地RNA沉淀未完全溶解

3.RNA降解原因

a:組織取出后沒有馬上處理或冷凍

b:樣品或提取地RNA沉淀保存于-5--20度，未在-60--70度保存

c:細胞在胰酶處理時被破壞

d:溶液或離心管未經RBase去處理

本文到此講解完畢了，希望對大家有幫助。