熒光原位雜交fish是檢測什么的（熒光原位雜交）

大家好，我是小夏，我來為大家解答以上問題。熒光原位雜交fish是檢測什么的，熒光原位雜交很多人還不知道，現在讓我們一起來看看吧！

該技術不但可用于已知基因或序列的染色體定位，而且也可用于未克隆基因或遺傳標記及染色體畸變的研究。在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。 在細胞遺傳學檢查中，重復序列的探針應用最多，它們是α衛星DNA、β-衛星DNA和經典衛星DNA探針。α衛星DNA探針主要檢測人染色體的著絲粒。β衛星DNA位于頂端著絲粒染色體及號染色體的異染色體質周圍.經典衛星DNA（classic-saiellite DNA）有著AATGG短片段重復，位于染色體1、9、15、16和Y染色體長臂異染色質周圍。后兩種探針除去可用于染色體數目檢查外，還可用于上述部位精細改變的檢查。三種探針產生的熒光信號都在染色體著絲粒或附，因此常用于鑒定，羊水細胞可不培養直接作FISH檢查，發現在21三體（Down氏綜合征）、18三體（Edward綜合征）、13體（Patau 綜合征）、45XO（Turner氏綜合征）和47XXY（Klinfelter綜合征）。

FISH在白血病方面和應用較為方泛的是慢性粒細胞白血病bcr/abl易位DNA探針，采用Digoxigenin標記于22號染色體上的bcr基因，用Biotin標記位于9號染色體上的Abl基因，然后用紅綠二種不同顏色的熒光素檢測，慢粒常有染色體易位t（9；22）（q34；q11）而引起bcr和Abl基因的融合，這時不需要檢測分裂中期細胞，在間期細胞中就可以見到二種顏色訊號的混合，從而可以確定是Ph陽性細胞。這特別適合化療后緩解的CML，極易發現殘存的白血病細胞。其它如t（15；17）易位DNA探針，t（18；21）易位DNA探針分別可用于急性早幼粒白血病（APL）和急性粒細胞白血病（AML）的診斷。此外在白血病的診斷方面，還有等位17號染色體長臂iso(17q),16號染色體長臂間倒位inv（16）探針等，都有商業出售。

在實體腫瘤方面，應用較為廣泛的是HER-2/neu基因探針。乳腺癌細胞中Her/2-neu基因的擴增常預示著患者預后較差。在FISH技術之前的所有測定基因擴增的方法，都是采用經典的分子生物學方法South blotting等），但這些方法與FISH相比，不僅費時費力，而且也不可能在細胞水平上觀察到基因擴增的狀態。FISH技術的更大優點是可以在間期細胞核上觀察到DNA擴增的直接證據，而且間期細胞核所顯示出的擴增DNA熒光信號其數量多少及熒光強度常與DNA擴增的水平有關。1998年美國政府FDA批準了作為基因治療的一種單克隆抗體Herceptin，可配合化療來治療部分晚期轉移性乳腺癌病人，約25-30%的乳腺癌病人有HER-2/neu基因的擴增和/或過度表達。這部分病人適合Herceptin治療、FDA在此前一些時候批準了Vysis公司的HER-2/neu基因DNA探針在乳腺癌臨床診斷上的應用。HER-2/neu基因的擴增或過表達也見于卵巢癌、子宮內膜癌、涎腺腫瘤及胃癌等惡 性腫瘤。可以預，在不久的將來Herceptin和HER-2/neu基因DNA探針可用于這些腫瘤的治療和診斷。其它一些實體瘤的腫瘤的腫瘤基因的探針如N-myc,C-myc,CyclinD1等雖有商業出售，但目前還未用于臨床。 染色體x,y,21,18和13的數量變化常與先天性疾病有關。采用染色體著絲粒重復序列DNA作為探針，可以確定分裂細胞或間期細胞這些染色體的數目止，如采用21號染色體的涂抹（painting）探針，根據標記區域的大小可檢測出Down氏綜合征的發生。

實體腫瘤的染色體研究比較困難，這是由于獲取足夠量的分裂期腫瘤細胞比較困難。使用染色體著絲特異探針，對間期細胞進行染色體數量變異分析，可獲得較好的結果。因此FISH技術十分有助于腫瘤細胞遺傳細胞遺傳學的研究。Hopman采用FISH技術研究膀胱癌，發現9號染色體的丟失。FISH檢測的結果與流式細胞儀分析的結果完全一致。Waldman等發現染色體數目的改變和腫瘤的分化及分期有著密切關系，如7號染色體嗇常見于有較高的Brdard分級和有較高的PCNA標記指數的晚期、惡性度高的腫瘤。Waldman認為這一現象可涉及到7號染色體上某些特殊基因的表達增加或被抑制。采用多種染色體探針，以不同的顏色標記，更適合于實體腫瘤染色體數目改變的異質性研究。

對于G或Q顯帶難以確定的染色體結構改變，運用FISH技術可以幫助解決。許多不能歸類的標記染色體，FISH技術可以確定畸變的來源，如Miura等報告21例非小細胞肺癌（NSCLC）的染色體改變，其中一例有2個標記染色體，用FISH檢測后證實是來自9號染色體的短臂梁色體上微細帶的丟失，普通顯帶常不易發現，用特定的基因探針檢測時，在正常應該有熒光信號的部位如不出現信號，表示有染色體的丟失。Lux等用Ankyrin基因作探針，檢測遺傳性球殂紅細胞增多癥病人的染色體和間期細胞，發現有這個基因的缺失。Taguchi等采用靠近3p21帶附近的6個不同位點的探會，比較異常和正常3號染色體，確定胸膜間皮瘤有3p21帶的缺失并推測這個區域可能存在重要的抑癌基因，為了進一步的分子生物學研究提供了重要線索。選擇按一定順序排列的基因探針，可以幫助確定染色體倒位，尤其是臂間倒位的性質，如急性白血病有16號染色體的倒位，選擇兩個分別位于斷裂點近端和遠端的粘粒探針，同時用16號染色體著絲位探針，正常細胞熒光信號的次序是：粘粒-粘粒-著絲粒，而白血病細胞的信號的次改變為粘粒-著絲粒-粘粒。

雜交細胞通常是含有單個人類染色體嚙齒動物細胞。這種雜交細胞常用于繪制基因圖譜或生產單個染色體特DNA庫。雜交細胞在培養過程中，人體染色體極易丟失或發生染色體重排，因此，需要對雜交細胞定期進行細胞遺傳學檢查，采用人體組DNA作為探針或相應人體染色體涂抹探針，可以很主便的檢測這些改變。 采用FISH技術，不僅可以直接確定某一DNA鏈在染色體上的位置，而且誚用多種顏色熒光素的標記控針，還提供了一個簡單的確定基因順序的方法。可用不同顏色熒光素標記兩個不同的DNA鏈，而且他們在染色體上的距離大于1Mbp時，可以依據不同探針信號的排列關系分辨他們在染色體上的順序。采用5-Burd處理的細胞，可以獲得高分辨顯帶的染色體，從而增加DNA鏈標記到染色體上的分辨能力。如果使用間期細胞，兩個DNA鏈的距離可以縮短至50Kbp，這個間距是染色體上的分辨距離的二十分之一。不同探針的次序可以通過測量其間期細胞的距離來確定。

確定DNA鏈在染色體上精細位置，適用于檢查某些特殊的染色體易位和缺失，如涉及11號染色體q23的易位常見于急性白血t（4；11）見于急性淋巴細胞白血病（ALL），t（6；11)，5（9；11）見于急性粒細胞白血病（AML），t（11；19）見于急淋和急粒兩種白血病。

標記同一DNA鏈與不同種必細胞的染色體雜交，可以找出不同種屬之間的同源基因以及基因在染色休上的位置，從而了解種屬之間的進化關系。 DNA擴增通常表現為異常的顯帶區域（ABRS）或異染質區（HSRS）以及無著絲微小體（DM），這些基因擴增的細胞遺傳學表現在許多惡性腫瘤中。搞清楚腫瘤細胞中物定DNA鏈（基因）的擴增，有助于了解腫瘤的惡性增生過程。在腫留細胞中某些腫瘤因(Oncogene)的擴增，可作為預測腫瘤進展及預后的臨床指征。如FISH能有效地在染色體上定位擴增的特定DNA，特別是當細胞遺傳學發現在HSR或ABRS來源及位置，推測可能擴增的腫瘤基因，從而有目的檢測某些基因，并能很快得到直接清晰的基因擴增的信息。Cherif等在結腸腺癌細胞中，采用FISH技術發現C-myc的擴增，而且C-myc擴增鏈是重排在19號染色體的長臂上。染色體上策細帶的丟失，普通顯帶不易發現，用特定的基因探針檢測時，在正常應該有熒光信號的部位如不出現信號，表示有染色體的丟失。用Ankyrin基因作探會，檢測遺傳性球殂紅細胞增多癥病人的染色體和間期細胞，發現有這個基因的缺失。有學者用FISH技術在37例B細胞淋巴瘤中發現21例（56.8%）存在6q23-24的缺失，故認為這一改變對淋巴瘤診斷有實際應用值。

本文到此講解完畢了，希望對大家有幫助。